5×考馬斯亮藍G- 250(蛋白定量用)北京索萊寶科技有限公司

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性能參數

產品名稱: 5×考馬斯亮藍G- 250(蛋白定量用)
英文名稱: Coomassie brilliant blue G-250
產品貨號: PC0015
產品規格: 100ml/500ml
試劑級別: 生化級
產品產地: 北京
產品商標: Solarbio
價    格: 120/240元
保存與運輸: 室溫
現貨狀態: 充足
產品資料: 資料下載
更新時間: 2020/5/27 8:37:00
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產品詳細描述

5×考馬斯亮藍 G-250(蛋白定量用)


貨號PC0015

規格:100mL/500mL

保存開封使用后請密封保存,本試劑盒自訂購之日起九個月內有效。

產品簡介:

考馬斯亮蘭 G-250 染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由 465nm 變為 595nm,在一定的濃度范圍內,測定的吸光度值 A595 與蛋白質濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,樣品中***的濃度可高達 1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達 5mM,但受略高濃度的去垢劑影響,需確保 SDS 的濃度低于 0.1%,Triton X-100低于 0.1%,Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用索萊寶生產的 BCA 蛋白濃度測定試劑盒。

自備試劑:PBS、BSA 標準品(5mg/ml)

操作說明:

一.微孔酶標儀法

1. 完全溶解蛋白標準品,取 10ul,稀釋至 250ul ,使終濃度為 0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀釋標準品。

2. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻,取 1ml 5×G250 染色液,加入 4ml 雙蒸水,混勻成 1×G250 染色液,此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

3. 將標準品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分別加到 96 孔板中,加 PBS 稀釋液補足到 20 微升。

4. 將樣品作適當稀釋(最好多做幾個梯度,如作 2 倍、4 倍、8 倍稀釋),加 20 微升到 96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差,標準線前面的點可能不很準確,所以盡可能的讓樣品點落在標準線 1/2 后。

5. 各孔加入 200 微升稀釋后的 1×G250 染色液,室溫放置 3-5 分鐘。

6. 用酶標儀測定 A595,或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度。

7. 根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。

二.分光光度計法

 如無酶標儀,染色反應可在離心管中進行,反應液混勻后加入比色皿中,使用分光光度計測定吸光值。

步驟如下:

 1. 取八支(或者更多)干凈的 10ml 離心管,標記上號。

 2. 取 100ulBSA 加入 PBS 2.4ml 稀釋至終濃度為 0.2mg/ml。

 3. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻,取 10ml 5×G250 染色液,加入 40ml 雙蒸水,混勻成 1×G250 染色液,此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

4. 按下表加入試劑(以每孔 5ml 計,多余的用來清洗比色皿)


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