TwistDx 的重組酶聚合酶擴增(RPA)將徹底改變在資源有限的現場環境中擴增和檢測核酸的能力

來源: 默瑞(上海)生物科技有限公司   2019-12-19   訪問量:1779評論(0)

TwistDx 的重組酶聚合酶擴增(RPA)將徹底改變在資源有限的現場環境中擴增和檢測核酸的能力。

RPA 技術原理

RPA 體系的重點是重組酶,這些酶與寡核苷酸引物形成復合體,并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對。單鏈 DNA 結合(SSB)蛋白與被取代的 DNA 鏈結合,并使形成的 D 環保持穩定。然后從引物啟動由聚合酶介導的 DNA 擴增,但前提是存在靶標序列。一旦啟動,擴增反應將快速進行,因此開始時只需一點靶標 DNA 拷貝數,高特異性 DNA 擴增在數分鐘內即可達到可檢出水平。

RPA 循環


RPA 的技術特點

為什么選擇 RPA 方法?

◇ 速度

RPA 非常快速,在 37~42 °C 這一通常最適宜的反應溫度下,只需少量核酸分子即可在 3~10 分鐘(通常)內擴增至可檢出水平,但這將取決于靶標大小。在大部分情況下,只需要一個人即可在半小時內采集樣本、制備樣本、運行檢測并取得結果,并且無需專業培訓。

◇ 靈敏度

RPA 可檢測復合樣本中的單拷貝 DNA 和 10 拷貝甚至更少 RNA,而無需預先純化核酸。

◇ 特異性

RPA 具有高度特異性,該技術可從可能含有數百納克來自多個不同物種的不相關復合基因組 DNA(包括人 DNA)的樣本中識別并擴增單個 DNA 分子,抗干擾能力強。

◇ 恒溫運行

RPA 在恒定的低溫(37~42 °C 最適宜)下運行。對于某些應用,如果需要,即便體溫也可支持 RPA 擴增。該反應在偏離溫度及低溫設置下也表現穩健,即使在常規室溫 25 °C 下也將奏效,雖然反應速度會下降; 在此溫度下,只要此生物化學過程被正確配置,仍可在一小時內獲得結果。

◇ 樣本容差

RPA 對樣本類型的要求寬松,有時可直接檢測未經核酸純化的原始樣本,例如血液、鼻拭子或培養基。通常,只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可,例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的最合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素,并將需要設計到檢測程序中。RPA 對某些復合樣本類型的寬容性使該技術非常適合廣泛的現場實地應用。

◇ 廣泛的適用性

RPA 能夠方便地應用于任何 DNA 或 RNA 靶標,無序列偏好性,這一點對于 NGS 尤其重要。如果將逆轉錄酶添加到反應混合液中開發出了超高靈敏度的 RNA 一步檢測法。

◇ 多重檢測

通過將多種引物同時添加到同一反應管中,單次 RPA 測試即可擴增和檢測多種不同的靶標。

◇ 低設備成本

RPA 僅需要基本的檢測設備,也就是說,最終用戶可以使用 RPA 技術開發出適合各種應用和環境的人性化診斷方法和試劑盒。

◇ 靈活的試劑形態

核心反應組分能夠以穩定的干燥形態供貨,該形態易于運輸,且無需冷藏即可儲存最多 12 個月(穩定性可能因用途不同而有變化,因此仍建議在冷藏條件下長期儲存),也能夠以 PCR 試劑更常見的液體形態供貨,該形態允許用戶針對特定的應用改變反應體積和組分比例。

◇ 多種檢測形式

RPA 可應用于各種檢測系統和儀器,包括實時熒光探針和夾心法等形式。


RPA 與 其他核酸擴增方法 PCR 及 LAMP 的比較



產品系列

TwistAmp® 試劑盒(隨附凍干試劑)的試劑形態具有高度便利性,非常適合在現場、床邊等環境中使用,而且特別適用于無法維持冷鏈的情況下。TwistAmp® 研究試劑盒包含使用最終用戶設計的特定引物進行核酸擴增時所需的所有試劑。

包含凍干試劑的 TwistAmp® 試劑盒具有以下優勢:

* RPA 擴增溫度要求低,允許使用低成本、便于攜帶的檢驗設備。

* 干 RPA 試劑足夠穩定,可以在室溫下運輸。

* 允許多種「適宜現場的」檢測輸出技術,例如側向層析技術和熒光技術。

* RPA 對一些復雜樣本類型表現出高度穩健性(即樣本耐受性),更適合于許多不同的現場實地應用。

除了在現場實地使用中的優勢,通過 TwistAmp® 試劑盒還便于為許多應用和用途開發出快速、特異且靈敏的 DNA 和 RNA 檢測方法。


TwistAmp® Basic 試劑盒可實現 DNA 擴增。包含 DNA 擴增所需的所有酶和試劑,用戶只需提供引物和模板。使用 TwistAmp® Basic 時,即使 PCR 引物也有效。TwistAmp® Basic 已被用于固相、加尾引物、配基、電化學和微陣列等應用。

非常適用于:終點凝膠電泳 DNA 檢測、下游應用(例如亞克隆)


TwistAmp® exo 試劑盒可實現實時熒光 DNA 擴增。若想要以均相形式將 TwistDx RPA 擴增技術與 TwistDx 專利熒光 TwistAmp® exo 探針結合使用,則推薦使用本產品。用戶只需提供引物、探針和模板。更多信息請參閱手冊。

非常適用于:實時熒光 DNA 檢測

TwistAmp® nfo 試劑盒可實現橫向流動檢測用 DNA 擴增。若想要通過終點夾心法(例如橫向流動 [LF] 試紙條)檢測有效 DNA 擴增反應的產物,則適合使用本產品。用戶只需提供引物、探針和模板。

非常適用于:開發低成本的現場側向層析檢測方法。


TwistAmp® Liquid 是為了提供散裝液體形態的核心 RPA 組分,最終用戶能夠以不同的比例混合這些組分,以便用戶為各自的應用配制預混液*。

TwistAmp® Liquid 具有以下優勢:

最終用戶可自由調整預混液制備量,而不再被局限于凍干試劑的固定體積

最終用戶可自由調整反應體系中的組分比例,這使 RPA 試驗開發工作具有更大的靈活性

TwistAmp® Liquid Basic 是一款最適合用于凝膠分析或者作固相、加尾引物、適配體、電化學和微陣列應用的 DNA 擴增試劑盒。TwistAmp® Liquid exo 是一款用于以實時熒光檢測擴增反應的 DNA 擴增試劑盒。

以靈活的液體形態實現 DNA 擴增。包含 DNA 擴增所需的所有酶和試劑,用戶只需提供引物、dNTP 和模板。更多信息請參閱手冊。

非常適用于:終點凝膠電泳 DNA 檢測、下游應用(例如亞克隆)、便于使用不同的 RPA 反應體積或改變組分比例

以靈活的液體形態進行實時熒光 DNA 擴增。若想要將 RPA 與 TwistDx 專利熒光 TwistAmp® exo 探針結合使用,則推薦使用本產品。除了基本的組分,還包含強大的核酸酶 (核酸外切酶 I),該酶將在擴增反應期間處理 TwistAmp® exo 探針并產生實時讀出。用戶只需提供引物、探針、dNTP 和模板。

非常適用于:實時熒光 DNA 檢測,便于使用不同的 RPA 反應體積或改變組分比例


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公司背景

TwistDx Inc. 由分子生物學家兼蛋白生物化學家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同創立,其總部位于美國馬薩諸塞州劍橋市。TwistDx Limited 于 2002 年成立,其公司位于英國劍橋,2010 年被 IVD 行業 POCT 巨頭美艾利爾 Alere 收購,Alere 在 2017 年 4 月被雅培 Abbott 收購。

    • TwistAmp® 凍干研發試劑盒
    • TwistAmp® Basic
    • TwistAmp® exo
    • TwistAmp® nfo
    • Twist Amp® Liquid 研發試劑盒
    • TwistAmp® Liquid Basic
    • TwistAmp® Liquid exo



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